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Plataforma de Proteómica

Análisis ofertados

DETERMINACIÓN DE MASAS MOLECULARES
  1. Determinación de masas moleculares de proteínas y péptidos mediante espectrometría de masas MALDI-TOF/TOF.
IDENTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS
  1. Identificación de proteínas mediante huella peptídica (MALDI-TOF).
    • Digestión enzimática con tripsina de las manchas proteicas a partir de geles de 2-DE, geles SDS-PAGE (1-D), o proteínas en solución.
    • Análisis de los péptidos mediante espectrometría de masas tipo MALDI-TOF. Obtención del mapa o huella peptídica.
    • Búsqueda en bases de datos e identificación de la proteína.
  2. Identificación de proteínas por fragmentación de péptidos mediante espectrometría de masas (MALDI-TOF/TOF).
    • Digestión enzimática con tripsina de las manchas proteicas a partir de geles de 2-DE o SDS-PAGE (1-D) o proteínas en solución.
    • Selección de precursor y secuenciación de novo (MS/MS).
    • Búsqueda e identificación de la proteína mediante, mediante la(s) secuencia(s) de péptidos (datos MS/MS).
  3. Secuenciación de péptidos mediante espectrometría de masas (MALDI-TOF/TOF).
  4. Identificación de mezclas de proteínas mediante nLC-MALDI-TOF/TOF.
    • Separación de mezclas de péptidos de diferente complejidad mediante nanocromatografía líquida capilar acoplada a un microcolector de fracciones para su posterior análisis mediante espectrometría de masas MALDI-TOF/TOF.
CROMATOGRAFÍA
  1. Separación de proteínas mediante cromatografía líquida.
    • Fase reversa (Zorbax)
    • Intercambio catiónico (SCX, PolyLC)
  2. Depleción de proteínas mayoritarias de suero por inmunoafinidad.
    • 20 mayoritarias (ProteoPrep 20, Sigma)
    • 14 mayoritarias (MARS Hu-14, Agilent)
ELECTROFORESIS
  1. Separación de proteínas mediante electroforesis monodimensional (SDS-PAGE).
  2. Separación de proteínas mediante Electroforesis Bidimensional (2-DE).
    • Esta técnica se basa en la separación de las proteínas en función a dos características: su punto isoeléctrico, pI (Isoelectroenfoque, IEF) y su peso molecular (Electroforesis en condiciones desnaturalizantes, SDS-PAGE).
    • Puede llevarse a cabo en geles de 7, 13, 18 y 24 cm, según la resolución requerida.
  3. Tinción de geles mono- y bidimensionales
    • Azul de Coomassie (clásica y coloidal)
    • Nitrato de Plata
    • Tinción fluorescente (SyproRuby)
  4. Análisis de imagen de geles bidimensionales (PDQuest o SameSpots)
PROTEÓMICA DIFERENCIAL
  1. Estudios de electroforesis diferencial en gel (2D-DIGE)
    • Marcaje de las muestras proteicas de las condiciones a comparar con Cy2, Cy3 o Cy5.
    • Separación de las mezclas de muestras marcadas mediante 2-DE.
    • Digitalización de las imágenes en escáner DIGE Imager.
    • Análisis de imagen (SameSpots).
  2. Marcaje metabólico de proteínas (SILAC) para análisis por LC-MS/MS
  3. Marcaje isobárico de péptidos (iTRAQ) para análisis por LC-MS/MS
  4. Análisis informático para la identificación y cuantificación de proteínas por LC-MS/MS (ProteinPilot)
OTROS
  1. Transferencia de geles a membrana
  2. Escaneado de geles
    • Visible (Coomassie, plata…)
    • Fluorescencia (Sypro, DeepPurple, Cys…)
  3. Preparación de muestras
    • Precipitación de proteínas.
    • Desalado (ZipTip o equivalente).
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