Plataforma de proteómica

Análisis ofertados

1. Determinación de masas moleculares de proteínas y péptidos mediante espectrometría de masas MALDI-TOF/TOF.

1. Identificación de proteínas mediante huella peptídica (MALDI-TOF).
   • Digestión enzimática con tripsina de las manchas proteicas a partir de geles de 2-DE, geles SDS-PAGE (1-D), o proteínas en solución.
   • Análisis de los péptidos mediante espectrometría de masas tipo MALDI-TOF. Obtención del mapa o huella peptídica.
   • Búsqueda en bases de datos e identificación de la proteína.
2. Identificación de proteínas por fragmentación de péptidos mediante espectrometría de masas (MALDI-TOF/TOF).
   • Digestión enzimática con tripsina de las manchas proteicas a partir de geles de 2-DE o SDS-PAGE (1-D) o proteínas en solución.
   • Selección de precursor y secuenciación de novo (MS/MS).
   • Búsqueda e identificación de la proteína mediante, mediante la(s) secuencia(s) de péptidos (datos MS/MS).
3. Secuenciación de péptidos mediante espectrometría de masas (MALDI-TOF/TOF).
4. Identificación de mezclas de proteínas mediante nLC-MALDI-TOF/TOF.
   • Separación de mezclas de péptidos de diferente complejidad mediante nanocromatografía líquida capilar acoplada a un microcolector de fracciones para su posterior análisis mediante espectrometría de masas MALDI-TOF/TOF.

1. Separación de proteínas mediante cromatografía líquida.
   • Fase reversa (Zorbax)
   • Intercambio catiónico (SCX, PolyLC)
2. Depleción de proteínas mayoritarias de suero por inmunoafinidad.
   • 20 mayoritarias (ProteoPrep 20, Sigma)
   • 14 mayoritarias (MARS Hu-14, Agilent)

1. Separación de proteínas mediante electroforesis monodimensional (SDS-PAGE).
2. Separación de proteínas mediante Electroforesis Bidimensional (2-DE).
   • Esta técnica se basa en la separación de las proteínas en función a dos características: su punto isoeléctrico, pI (Isoelectroenfoque, IEF) y su peso molecular (Electroforesis en condiciones desnaturalizantes, SDS-PAGE).
   • Puede llevarse a cabo en geles de 7, 13, 18 y 24 cm, según la resolución requerida.
3. Tinción de geles mono- y bidimensionales
   • Azul de Coomassie (clásica y coloidal)
   • Nitrato de Plata
   • Tinción fluorescente (SyproRuby)
4. Análisis de imagen de geles bidimensionales (PDQuest o SameSpots)

1. Estudios de electroforesis diferencial en gel (2D-DIGE)
   • Marcaje de las muestras proteicas de las condiciones a comparar con Cy2, Cy3 o Cy5.
   • Separación de las mezclas de muestras marcadas mediante 2-DE.
   • Digitalización de las imágenes en escáner DIGE Imager.
   • Análisis de imagen (SameSpots).
2. Marcaje metabólico de proteínas (SILAC) para análisis por LC-MS/MS
3. Marcaje isobárico de péptidos (iTRAQ) para análisis por LC-MS/MS
4. Análisis informático para la identificación y cuantificación de proteínas por LC-MS/MS (ProteinPilot)

1. Transferencia de geles a membrana
2. Escaneado de geles
   • Visible (Coomassie, plata…)
   • Fluorescencia (Sypro, DeepPurple, Cys…)
3. Preparación de muestras
   • Precipitación de proteínas.
   • Desalado (ZipTip o equivalente).